一、试剂介绍
当生物样本的自发荧光过强,或者需要进行高度复杂的多重蛋白分析时,位于远红/近红外光谱区的荧光标记物就成为破局的关键信号放大器 。CF680R Tyramide Conjugates 正是这一领域的佼佼者。它继承了酪胺信号放大技术无与伦比的灵敏度,并融合了CF680R染料卓越的光物理特性,为您在深层组织成像和高重多重检测中带来前所未有的清晰度。
(1)工作原理:HRP催化的原位信号沉积
其工作原理与CF640R TSA完全一致信号放大器 ,依赖于HRP的催化活性:
1、免疫识别:一抗与靶标结合,随后HRP标记的二抗与一抗结合信号放大器 。
2、酶促活化:在HRP和低浓度过氧化氢存在下,加入CF680R Tyramide信号放大器 。
3、自由基生成:HRP催化酪胺分子氧化,生成高反应活性的酪胺自由基信号放大器 。
4、共价沉积:这些自由基瞬间地与周围蛋白质的酪氨酸残基共价交联,在HRP所在的位点形成一层密集的CF680R荧光团沉积信号放大器 。
5、信号放大:每个HRP分子可催化沉积数百至数千个荧光分子,从而实现信号的百倍至千倍放大信号放大器 。
(2)实验要点与优化建议
光谱验证:在使用前,务必在您的成像系统上确认CF680R的实际激发和发射光谱,并设置合适的滤光片,以最大化信号收集并最小化来自其他通道的串色信号放大器 。
严格的淬灭步骤:在进行多重TSA实验时,在每一轮CF680R TSA反应后,必须使用HRP抑制剂(如含有H₂O₂的缓冲液)彻底淬灭HRP活性,然后再进行下一轮抗体孵育,否则会导致严重的假阳性信号放大器 。
抗体特异性至关重要:由于信号被极度放大,任何一抗的非特异性结合都会被同样放大信号放大器 。因此,必须使用经过验证的高特异性抗体,并设置严谨的阴性对照。
滴定是关键:CF680R Tyramide和H₂O₂的浓度以及反应时间都需要精细优化信号放大器 。建议进行梯度实验,以找到信噪比最高的条件。
总结而言,CF680R Tyramide Conjugates是将超灵敏检测能力推向光谱极限的强大工具信号放大器 。它特别适用于那些背景噪音高、靶标表达低、或需要获取最多信息的复杂多重分析场景,是推动前沿生命科学研究,尤其是空间多组学和精准病理学发展的利器。
二、试剂属性
中文名称:CF680R酪酰胺信号放大试剂
英文名称:CF680R Tyramide Conjugates
激发波长Ex(nm):680
发射波长Em(nm):700
纯度:≥95%
外观:固体
品牌:陕西新研博美生物科技有限公司
溶解性:溶于部分有机溶剂以及水
储存条件:-20℃以下冰冻、干燥避光保存信号放大器 ,避免反复冻融
规格:1mg信号放大器 ,5mg,10mg
三、相关试剂
Carboxyrhodamine 110 Alkyne
Carboxyrhodamine 110 LC Acid
IR 680LT Maleimide
IR 750 Maleimide
Carboxyrhodamine 110 PEG4 Acid
Carboxyrhodamine 110 PEG4 DBCO
Fmoc - Lys(CR110) - OH
PB LC Acid(PB:Pacific Blue)
Difluorocarboxyfluorescein Cadaverine, 5-isomer
IR 650 Picolyl Azide
IR 650 Maleimide
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该试剂只用于科研实验,不能用于人体信号放大器 。